u6启动子，u6启动子转录起始点第一个G

本文目录一览：

• 1、双荧光素酶应用实例(一)
• 2、u6启动子原理
• 3、泛素化启动子U6能启动拟南芥表达吗
• 4、构建RNAi载体用的I型启动子和其他启动子有什么区别?用II型不行么...
• 5、u6启动子特点
• 6、用于荧光定量PCR的内参照U6,只需要扩出启动子70到100bp就可以吗?_百度...

双荧光素酶应用实例(一)

1、结果显示，WRKY46明显抑制由完整ALMTI启动子(P1) 带动的荧光素酶的活性，但不影响5端缺失的启动子(P2) 带动的荧光素酶活性， 说明缺失的启动子序列(含6个W-box 元件)对WRKY46与ALMTI启动子的相互作用至关重要。例子4 例子5---启动子结构分析。

2、深入探索双荧光素酶实验：揭示其奥秘与广泛应用在现代生物科学研究中，双荧光素酶实验凭借其卓越的灵敏度和广泛的适用性，已成为miRNA靶基因验证、转录因子调控等领域不可或缺的工具。这个实验的核心理念源自自然界中的萤火虫和海肾荧光素酶，通过构建精密的荧光酶表达载体，实现对细胞调控效应的精确评估。

3、在基因功能研究的广阔领域中，一种强大的工具被科学家们广泛应用，那就是双荧光素酶报告分析。

4、常用的荧光素酶载体如pGL3-Basic、pRL-TK和pmirGLO，为各种基因研究提供了丰富的构建平台。从microRNA-mRNA靶向互作的验证，到启动子结构和SNP分析，双荧光素酶的应用范围广泛且精准。

5、双荧光素酶报告基因实验是常用的生物学实验方法，用于研究基因表达调控和信号转导通路等相关过程。该实验原理基于荧光素酶的荧光反应和其底物荧光素的发光性质。

u6启动子原理

1、u6启动子原理：与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。u6启动子原理然后用软件分析，一般就找到转录起始位点了，转录起始位点也就在启动子位置。如果没有基因组序列，就比较麻烦，需要用染色体位移技术，先克隆到哪个序列，在用软件做分析。

2、可以。pU6-gRNA体外转录载体是U6启动子，打靶预测是否准确取决于向导RNA是不是由U6启动子表达或者在体外转录。启动子是RNA聚合酶的结合位点，负责转录的起始位置，但该片段没有对应的mRNA，不能被转录。

3、启动子结构分析。将启动子区域(约2k左右)进行分段截短或突变，构建入报告基因载体，检测荧光素酶活性。启动子SNP分析。一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性，可运用荧光素酶报告系统分析其相对活性。验证信号通路是否激活。

泛素化启动子U6能启动拟南芥表达吗

U6启动子不是通用启动子，其启动需要一些特异性元件。理论上来说，可以启动某些不是太长的基因表达。如果不是用来启动全长CDS表达，而是仅作为一些特殊用途，如做shRNA干扰，就没有问题。

如使用不同的启动子，包括天然的WRKY13启动子和玉米ubi启动子，增加水稻R基因Xa3/Xa26的表达，可以增加对Xoo抗谱。过表达水稻PRRs OsLYP4和OsLYP6的使对Xoo和稻瘟病产生BSR。 利用防御信号和PR基因来设计BSR是可能的，因为它们通常在免疫受体的下游起作用。 使用TALEN/CRISPR靶向小麦的Mlo位点使得植物抗白粉病。

更为深入的实验中，研究人员发现COP1的SUMO化修饰与其泛素化E3连接酶活性密切相关。Myc-COP1突变体与正常SUMO修饰的COP1材料对比，证实了SUMO化修饰对COP1活性的直接影响。

构建RNAi载体用的I型启动子和其他启动子有什么区别?用II型不行么...

1、采用RNA pol III启动子的原因是由于它有明确的启始和终止序列，总是在离启动子一个固定距离的位置开始转录合成RNA，遇到4—5个连续的U即终止，并且转录产物在第二个尿嘧啶处被切下来，非常精确，而且还可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA。

2、肝细胞中表达的高活性启动子使小鼠过表达OPG (osteoprotegerin) 基因，得到的转基因小鼠的骨密度 明显高于正常小鼠，说明该基因参与骨质合成[4 ] 。 3 　其他研究基因功能的方法 定点诱变( site2directed mutagenesis) 或体外诱 变( in vit ro mutagenesis) 可以用来探索基因的具体 功能。

3、其更安全、更稳定、更高效的技术优势领先于市场上的三质粒及其他包装系统。综上特点决定了其应用、意义：用慢病毒载体携带目的基因比用质粒瞬时转染更适于稳转株构建。

4、mRNA tRNA rRNA的区别：功能不同：rRNA是组成核糖体的主要成分。核糖体是合成蛋白质的工厂。rRNA一般与核糖体蛋白质结合在一起，形成核糖体（ribosome）。tRNA是分子最小的RNA，又称转运RNA。如果说mRNA是合成蛋白质的蓝图，则核糖体是合成蛋白质的工厂。

u6启动子特点

1、CMV 启动子活性较强，而 U6 启动子则较弱；CMV 启动子和 U6 启动子的转录终止序 列不同。

2、u6启动子原理RNAi具有的特征：①RNAi是转录后水平的基因沉默机制。②RNAi具有很高的特异性，只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA。

3、可以。pU6-gRNA体外转录载体是U6启动子，打靶预测是否准确取决于向导RNA是不是由U6启动子表达或者在体外转录。启动子是RNA聚合酶的结合位点，负责转录的起始位置，但该片段没有对应的mRNA，不能被转录。

用于荧光定量PCR的内参照U6,只需要扩出启动子70到100bp就可以吗?_百度...

可以的，50bp到150bp都可以，只要你设计的引物探针特异性好，是可以做出来的；不过一般都是100bp-150bp左右比较好，我研究过中山达安公司09年的H1N1检测试剂盒，通过TA克隆得知，他们的检测H1N1病毒的H1跟N1两管混合液中扩增目的片段的长度都是70bp左右。

模板与稳定性较小的引物之间的Tm的差异越小，PCR的效率越高。

结果：荧光定量可以实现精确定量，普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程，可以看到扩增效率，溶解温度，直接得到的标准曲线等，这些是普通pcr无法实现的。|||这个还真不大清楚|||貌似前者是定量，后者属于半定量。

荧光定量PCR　实验步骤： ①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。

不过需要澄清一下，这里所说的定量PCR还不是指荧光定量PCR，那时还没有将荧光物质用于PCR产物的监控。直到1992年，罗氏公司的R Higuchi等在Nature发表论文，介绍了将溴化乙锭(EB)用于PCR产物动态监控的方法，这可能是最早的荧光定量PCR技术了。1996年，ABi公司公布了基于Taqman探针的qPCR技术。

一般进行探针法荧光定量PCR时是不是最好采用内标来监控反应体系呢，如果不适用的话，对实验有什么影响么？ps：我是做绝对定量的。